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李記生物細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑常見問題(一)

更新時(shí)間:2022-11-07      點(diǎn)擊次數(shù):2006

涉及產(chǎn)品

  1. EZ Trans Plus細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑(Ⅱ) 貨號(hào):AC04L011

  2. EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑(高效)  貨號(hào):AC04L091/AC04L092

  3. EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑(低毒)  貨號(hào):AC04L098/AC04L099

其他轉(zhuǎn)染產(chǎn)品

  1. EZ Trans Pro細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑(GMP) 貨號(hào):AC04L032/AC04L033/AC04L034

  2. EZ Trans RNA轉(zhuǎn)染試劑       貨號(hào):AC04L051

李記生物細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑常見問題(一)

Q1:李記有3款轉(zhuǎn)染試劑,這3款有什么區(qū)別?和Li**對(duì)比效果如何?

A1:我司自行測(cè)試與收集客戶反饋數(shù)據(jù),得到類似結(jié)論:

  效率方面:EZ Trans Plus>Li**2000≈EZ Trans(高效)>Li** 3000>EZ Trans(低毒)

  毒性方面:EZ Trans(低毒)≈Li**3000<EZ Trans Plus<EZ Trans(高效)≈Li**2000

 

 

 

 

 

 


Q2:我們傳的細(xì)胞有抗生素,抗生素是絕對(duì)會(huì)影響轉(zhuǎn)染效率嗎?

A2:能不加盡量不加,理論上抗生素進(jìn)不到細(xì)胞內(nèi),但是在轉(zhuǎn)染試劑的作用下,細(xì)胞的通透性增加,抗生素可能進(jìn)到細(xì)胞內(nèi),對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果完成影響。

 

 

 

 

 

 


Q3:protocol提到,要用Opti-MEM稀釋質(zhì)粒和轉(zhuǎn)染試劑。不能用1640稀釋么?另外質(zhì)粒和轉(zhuǎn)染試劑為什么要先稀釋然后再混合?不能把轉(zhuǎn)染試劑直接加到質(zhì)粒溶液中混合,然后再加培養(yǎng)基稀釋么?

A3:EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染液屬于陽離子類型的轉(zhuǎn)染試劑,它與DNA形成復(fù)合物需要一定的條件,在合適的濃度下,有利于陽離子包裹DNA形成良好形態(tài)的復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞。

  如果直接把兩者直接混合,兩者容易很快形成聚合物,聚集相態(tài)多樣,有可能使DNA暴露在表面,不容易進(jìn)入細(xì)胞,進(jìn)而降低轉(zhuǎn)染效率。所以EZ Trans和DNA的混合順序也很重要。

  培養(yǎng)細(xì)胞大多會(huì)用到胎牛血清,血清成分復(fù)雜,沒有人能說清成分及含量。細(xì)胞轉(zhuǎn)染液成分比較明確,但是不能確定是會(huì)不會(huì)與胎牛血清的不明成分結(jié)合,事實(shí)上這種現(xiàn)象在大多數(shù)轉(zhuǎn)染試劑中都會(huì)造成不良影響,所以在形成EZ Trans-DNA復(fù)合物過程中要避免血清的影響。

 

 

 

 

 

 

 


Q4:protocol提到,“24-48小時(shí)內(nèi)檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率"指的是去除含復(fù)合物的培養(yǎng)液換成含血清的培養(yǎng)基之后的24-48h,還是指加入復(fù)合物后轉(zhuǎn)染24-48h?

A4:所有時(shí)間都是從EZ Trans-DNA復(fù)合物與細(xì)胞接觸開始算。

 

 

 

 

 


 

Q5:我就是問的體內(nèi)直接轉(zhuǎn)染小鼠。你們現(xiàn)有的protocol是體外實(shí)驗(yàn)的方法?

A5:體內(nèi)直接轉(zhuǎn)染目前最多的是腺病毒,慢病毒,腺相關(guān)病毒。轉(zhuǎn)染試劑直接在體內(nèi)用的報(bào)道我們目前沒有聽過。現(xiàn)有的做法是細(xì)胞在體外培養(yǎng),轉(zhuǎn)染篩選后再打入體內(nèi)。


文中涉及的生物試劑產(chǎn)品都為上海李記生物科技有限公司提供,還有WB技術(shù)服務(wù)等竭誠為您服務(wù)

 

 

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