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細胞凍存原理與方法(細胞凍存液選擇)

更新時間:2024-05-06      點擊次數(shù):585

近年來,通過輸注免疫細胞或干細胞進行相關(guān)疾病的治療取得良好療效,細胞治療技術(shù)展示出越來越廣闊的臨床應(yīng)用前景。通常細胞從采集到臨床應(yīng)用會間隔很長時間,而新鮮細胞產(chǎn)品保存時限較短,為了延長細胞保存時限或長期保存細胞產(chǎn)品,需要對細胞進行冷凍后儲存。

細胞冷凍保存的原理

細胞凍存是通過冷凍保護機制將細胞放在低溫環(huán)境,減少細胞代謝,保持細胞活性,以便長期儲存的一種技術(shù)。細胞復(fù)蘇后,蛋白質(zhì)仍有活性,細胞的結(jié)構(gòu)和功能仍完好。

隨著溫度降低,細胞內(nèi)外的水分都會結(jié)晶,所形成的冰晶會造成細胞膜和細胞器的破壞,特別是0~-20℃的階段,冰晶呈針狀,極易引發(fā)細胞損傷。在不加任何保護劑條件下直接凍存細胞時,細胞內(nèi)外環(huán)境中形成的冰晶,能導(dǎo)致細胞內(nèi)發(fā)生機械損傷、電解質(zhì)升高、滲透壓改變、脫水、pH改變、蛋白變性等,引起細胞死亡。

如果在細胞溶液中加入冷凍保護劑,可保護細胞免受溶質(zhì)損傷和冰晶損傷。冷凍保護劑容易同水分子結(jié)合,降低冰點,在緩慢的凍結(jié)條件下,能使細胞內(nèi)水分在凍結(jié)形成冰晶前透出細胞,并且通過降低未結(jié)冰溶液中電解質(zhì)的濃度,使細胞免受溶質(zhì)損傷,細胞得以在超低溫(液氮)條件下保存。冷凍保護劑對細胞的冷凍保護效果還與冷凍速率、冷凍溫度和復(fù)溫速率有關(guān),且不同的冷凍保護劑其冷凍保護效果也不一樣。

細胞冷凍保護劑

細胞冷凍保護劑可以根據(jù)否穿透細胞膜分為滲透性和非滲透性兩種。滲透性冷凍保護劑可以透過細胞膜滲透到細胞內(nèi),多為小分子,包括二甲基亞砜(DMSO)、甘油、乙二醇、丙二醇、甲醇、乙醇等,這類保護劑能夠在細胞冷凍懸液凝固之前,穿過細胞膜滲透到細胞內(nèi),減少細胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少細胞損傷。DMSO是臨床級凍存保護劑中重要的成分,目前經(jīng)典的凍存保護劑中通常含有10%左右的DMSO。DMSO是常用的凍存保護劑和常用藥用輔料,在國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心藥用輔料數(shù)據(jù)庫可以查詢到其詳細信息。非滲透性冷凍保護劑一般是一些大分子物質(zhì),不能滲透到細胞內(nèi),主要包括右旋糖苷、蔗糖、聚乙二醇、葡聚糖、白蛋白等,其可以優(yōu)先同溶液中的水分子相結(jié)合,使冰點降低,減少冰晶的形成。由于其分子量大,可以使溶液中電解質(zhì)濃度降低,從而減輕溶質(zhì)損傷,同時能降低溶液中低分子溶質(zhì)(電解質(zhì))濃度,減輕鹽損傷。

細胞冷凍保存的一般流程

細胞凍存過程要緩慢,復(fù)蘇則相反,應(yīng)快速升溫。慢凍的原因如上所述,為了避免降溫時,細胞內(nèi)的水分還未來得及脫離細胞,但卻形成冰晶,對細胞造成損傷。(1)凍存前觀察細胞狀態(tài),測定細胞活率和計數(shù)。(2)將要凍存的細胞收集于離心管中,1200~1800rpm,離心5min,棄上清。(3)根據(jù)需要調(diào)整細胞凍存密度,緩慢加入適當體積配制好預(yù)冷的凍存液或市售的無血清細胞凍存液,重懸細胞。(4)將細胞懸液分裝至凍存管中,旋緊管蓋,做好標記。(5)將凍存管放入程序降溫盒(預(yù)冷)內(nèi),然后放至-80℃冰箱過夜,次日轉(zhuǎn)移至液氮罐中長期保存。



如何選擇細胞凍存液

細胞凍存液的質(zhì)量和成分對細胞的凍存效果有很大的影響。如果細胞凍存液的成分不合適或質(zhì)量不達標,可能會導(dǎo)致細胞凍存失敗或細胞復(fù)蘇后存活率低。

選擇細胞凍存液時,應(yīng)考慮以下3個重要因素:

(1)細胞類型,不同的細胞類型對細胞凍存液的成分和濃度有不同的要求。

(2)凍存時間,細胞凍存的時間越長,對細胞凍存液的要求越高。

(3)復(fù)蘇率,細胞凍存液的質(zhì)量和成分對細胞的復(fù)蘇率有很大的影響。

下面給你介紹下李記生物~李記生物細胞凍存液的主要產(chǎn)品:

  • 藥輔級細胞凍存液(非程序降溫)

  • 快速細胞凍存液(GMP級)

  • 無血清細胞凍存液(無DMSO)

  • 無血清細胞凍存液(增強型)

  • 快速細胞凍存液(無血清、無蛋白)

一、快速細胞凍存液(無血清、無蛋白)

產(chǎn)品描述

和元李記快速細胞凍存液(無血清、無蛋白)可適應(yīng)于絕大部分腫瘤細胞和常規(guī)細胞,大部分干細胞(和元李記已測試細胞種類請關(guān)注),凍存細胞可在 -80℃ 長期保存(>6年)。不含動物源性蛋白,不含血清成分,可有效減少各類細菌、病毒和支原體等污染,保證凍存細胞的安全。該凍存液含DMSO、葡萄糖等各種細胞營養(yǎng)成分,提高細胞存活率和活力,亦適合于無血清培養(yǎng)細胞和蛋白表達細胞。

產(chǎn)品優(yōu)勢

  1. 無需程序性降溫,可直接將細胞放入凍存液置于-80℃冰箱(-80℃可保存>6年),凍存液無需稀釋。

  2. 凍存液不含血清,大大降低細胞污染可能性。

  3. 不要加血清,不要反復(fù)逐級降溫,不要液氮,綜合下來省時更省錢。

  4. 案列可于-資源支持查詢!

  5. 各細胞凍存數(shù)據(jù),可參考下方李記凍存液數(shù)據(jù)庫(數(shù)據(jù)由使用客戶反饋)

產(chǎn)品組分

產(chǎn)品名稱貨號規(guī)格
快速細胞凍存液(無血清、無蛋白)AC05L03230mL
快速細胞凍存液(無血清、無蛋白)AC05L033100mL

運輸與保存

常溫運輸。4℃保存,有效期24個月。

二、無血清細胞凍存液(無DMSO)

產(chǎn)品描述

李記生物無血清細胞凍存液(無DMSO)適用于多種細胞的冷凍保存,尤其適用于原代肝細胞、神經(jīng)細胞等的凍存。

訂購信息

產(chǎn)品名稱貨號規(guī)格
無血清細胞凍存液(無DMSO)AC05L164100mL

產(chǎn)品參數(shù)

pH值:25±2℃時,7.2-7.8
細菌:陰性
真菌:陰性
支原體:陰性

運輸與保存

藍冰運輸。4℃密封保存,有效期12個月。

三、無血清細胞凍存液(增強型)

產(chǎn)品描述

李記生物無血清細胞凍存液(增強型)適用于常用動物細胞系的冷凍保存,尤其適用于原代細胞、干細胞等的冷凍保存。

訂購信息

產(chǎn)品名稱貨號規(guī)格
無血清細胞凍存液(增強型)AC05L053100mL

產(chǎn)品參數(shù)

外觀:淡黃色澄清溶液
pH值:25±2℃時,7.2-7.8
細菌:陰性
真菌:陰性
支原體:陰性
內(nèi)毒素:<1 EU/mL

運輸與保存

藍冰運輸。4℃密封保存,有效期24個月。

四、快速細胞凍存液(GMP級)

產(chǎn)品描述

和元李記快速細胞凍存液(GMP級)不含動物源性蛋白,不含血清成分,可有效減少各類細菌、病毒和支原體等污染,保證凍存細胞的安全。通用于各種動物細胞株,尤其適用于各類原代細胞、干細胞及雜交瘤等蛋白表達細胞的凍存。

本產(chǎn)品含多種保護劑、穩(wěn)定劑組合,可顯著降低凍存過程中溶液冰點,提高細胞膜對水的通透性,有效防止冰晶對細胞的損傷;同時降低冰凍時細胞周圍電解質(zhì)濃度,避免電解質(zhì)損傷;還可延緩凍存過程中細胞的互相擠壓,保護細胞膜。從而極大提高細胞復(fù)蘇率和活力。

產(chǎn)品優(yōu)勢

  1. 便捷:即用型,無需程序性降溫,可直接將細胞放入凍存液置于-80℃冰箱,也可在后續(xù)轉(zhuǎn)移至液氮中進行長期保存。

  2. 高效:細胞存活率和復(fù)蘇活力高,普遍高于90% 。

  3. 安全:無血清,無動物源成分,化學(xué)成分明確,大大降低細胞污染可能性。

  4. 質(zhì)優(yōu):嚴格的質(zhì)量控制,產(chǎn)品性能媲美進口;所有原料均選自經(jīng)嚴格檢測的低內(nèi)毒素、高純藥用級別原料,采用低DMSO配方,注射用水配置符合GMP生產(chǎn)。

  5. 批間差異小:全程于GMP潔凈車間生產(chǎn)與包裝,并經(jīng)過嚴格的內(nèi)毒素、滲透壓、 PH、細菌病原體等質(zhì)量檢測,確保產(chǎn)品質(zhì)量及批次間的一致性。

  6. 適用范圍廣:通用于各種動物細胞株,尤其適用于各類原代細胞、干細胞及雜交瘤等蛋白表達細胞的凍存;已通過實驗證明不不會影響干細胞表型和生長狀態(tài),且可維持干細胞的多分化性。

  7. 案列可于-資源支持查詢!

產(chǎn)品組分

產(chǎn)品名稱貨號規(guī)格
快速細胞凍存液(GMP級)AC05L043100mL

運輸與保存

藍冰運輸。4℃保存,有效期12個月。

五、藥輔級細胞凍存液(非程序降溫)

產(chǎn)品描述

藥輔級細胞凍存液(非程序降溫)是由李記生物自主研發(fā)的含有7.5% DMSO,無血清、無動物成分的即用型細胞凍存液,在超低溫(-80℃~-196℃)環(huán)境下為細胞提供一個安全、有效的保護環(huán)境,凍存復(fù)蘇后細胞活率可達90%以上。

本產(chǎn)品含有甘氨酸,DMSO以及磷酸鹽緩沖液的水溶液,適用于間充質(zhì)干細胞的冷凍保存。

訂購信息

產(chǎn)品名稱貨號規(guī)格
藥輔級細胞凍存液(非程序降溫)AC05L174100mL

產(chǎn)品參數(shù)

外觀:澄清透明溶液
裝量:應(yīng)不低于標示裝量
pH值:7.0~7.6(25±2℃)
滲透壓:1650~2025 mOsmol/Kg
無菌:應(yīng)無菌生長
支原體:應(yīng)符合規(guī)定
內(nèi)毒素:<0.25EU/mL

運輸與保存

藍冰運輸。4℃密封保存,有效期24個月。

本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。



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