SmartCell溶酶體染色試劑盒*Orange*產品描述

     溶酶體是細胞內具有單層膜囊狀結構的細胞器，溶酶體被比喻為細胞內的“酶倉庫"或“消化系統(tǒng)"，溶酶體內含有許多種水解酶類，能夠將細胞吞噬進的食物或致病菌等大顆粒物質消化成生物大分子，殘渣通過外排作用排出細胞，分解很多種物質，也能在細胞分化過程中，將陷入溶酶體內的某些衰老細胞器和生物大分子消化。溶酶體膜內pH值約4.5-4.8，使得消化酶類可以在酸性條件下工作，溶酶體外的胞質內，pH值為7.2左右，溶酶體膜通過從胞質泵入H+維持溶酶體內外這種pH差異。

   Smart Cell溶酶體染色 試劑盒*Orange*可以標記活細胞中的溶酶體，使之帶橙色熒光(Ex/Em =542/556 nm)。本試劑盒使用染料為一種疏水性復合物，屬趨溶酶體染料，染料滲透進入完整的活細胞中，有選擇性進入溶酶體，并因溶酶體膜內外的不同pH環(huán)境而被鎖定在溶酶體中。染料一旦進入溶酶體中，熒光顯著性增強并非常穩(wěn)定。基于這一特點，本試劑盒可以用于酶標版、免疫組化和流式細胞技術等應用，用于多種不同類型的研究中，包括細胞粘附性、趨化性、多藥物抗性、細胞活性、細胞凋亡和細胞毒性的研究，適用于增殖型和非增殖型細胞，也可以用于懸浮和貼壁細胞。

     Smart Cell溶酶體染色試劑盒是Life-iLab公司專門研發(fā)的一類熒光成像工具，試劑盒設計嚴謹，需人為手動操作的步驟很少。可用來標記細胞器、亞細胞等結構，例如細胞膜、溶酶體、溶酶體和細胞核等。Smart Cell溶酶體染色試劑盒提供了標記溶酶體的全套試劑，針對每種細胞結構都能提供藍色/綠色/紅色/橙色等不同熒光供選擇，既可單獨使用，也支持對細胞的多重熒光分析。這種高效的細胞標簽為從空間上和時間上研究發(fā)生的細胞活動提供了一種十分有效的方法。

SmartCell溶酶體染色試劑盒*Orange*試劑盒組分

使用方法

1. 準備溶酶體染色液

1.1 室溫避光放置5-10分鐘，預熱LysoBrite Orange染料(Component A)。

1.2 取20µL預熱好的LysoBrite Orange染料(Component A)，用10 mL活細胞染色緩沖液(Component B)進行稀釋。

注意：1) 20μL LysoBrite Orange染料(Component A)足夠完成1塊96孔板實驗，剩余的LysoBrite Orange染料(Component A) 可以根據(jù)需要分裝避光保存于-20℃，避免反復凍融。2)染料濃度根據(jù)具體應用會有不同，染色條件根據(jù)細胞類型、細胞或組織的染料滲透性不同可以進行調整優(yōu)化。

2. 細胞染色

2.1 貼壁細胞：在96孔板（100μL）或培養(yǎng)皿內培養(yǎng)細胞，當細胞達到70-80%融合度，在96孔板或培養(yǎng)皿內添加等體積的染色工作液(步驟1.2)，在37°C, 5% CO2條件下培養(yǎng)細胞30分鐘-2小時。用 TRITC濾光片在顯微鏡下進行熒光觀察。

注意：如果細胞沒有充分染色，可以適當增加染料濃度或增加染色時間進行改善

2.2 懸浮細胞: 在1000 rpm 條件下離心細胞培養(yǎng)液5分鐘，棄去上清，用預熱好的細胞培養(yǎng)液溫和的重懸細胞，然后添加等體積的染色工作液(步驟1.2)，在37°C, 5% CO2條件下培養(yǎng)細胞30分鐘-2小時。用 TRITC濾光片在顯微鏡下進行熒光觀察。

圖1：U2OS 細胞用SmartCell溶酶體染色 試劑盒*Orange*染色后進行成像分析

                      （所用96孔板為Costar black）