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腸激酶(Enterokinase，EK，EC3.4.21.9)是一種異源二聚體形式存在于哺乳動(dòng)物十二指腸內(nèi)的絲氨酸蛋白酶。它能高效專一性的水解工程菌表達(dá)的融合蛋白（識(shí)別位點(diǎn)是Asp-Asp-Asp-Asp-Lys）釋放出目的蛋白，被廣泛用于生物工程制藥的開發(fā)。牛腸激酶由一條結(jié)構(gòu)亞基（重鏈）和一條催化亞基（輕鏈）構(gòu)成，二者以二硫鍵結(jié)合。據(jù)報(bào)道，重組腸激酶輕鏈體外具有全酶的酶切特異性，同時(shí)對(duì)基因工程融合蛋白底物的酶切活性較提純的牛腸激酶明顯增強(qiáng)。天然腸激酶來源有限，且從動(dòng)物組織提...

簡(jiǎn)析各類細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA，RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。定義隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展，轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細(xì)胞基因功能的常規(guī)工具。下文中將從多個(gè)維度，介紹細(xì)胞轉(zhuǎn)染的各類小知識(shí)。一、瞬時(shí)轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)能促使在其內(nèi)表達(dá)的蛋?正確折疊并進(jìn)行復(fù)雜修飾，表達(dá)的蛋?更接近真實(shí)自然狀態(tài)，便于模擬真實(shí)細(xì)胞內(nèi)環(huán)境，進(jìn)行蛋白功能研究。把目的基因轉(zhuǎn)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞，表達(dá)?產(chǎn)蛋?通常有兩種?式：瞬時(shí)轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染（構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞系），如圖...

這篇文章主要講的是幾種常用的RNA提取方法。1、異硫氰酸胍氯化銫超速離心法原理：使用蛋白質(zhì)變性劑異硫氰酸胍有效抑制RNA酶的活性，經(jīng)過起始密度為1.78g/ml的氯化銫介質(zhì)，進(jìn)行密度梯度超速離心，RNA沉淀于管底，而DNA與蛋白質(zhì)在上清中。使用這種方法，不但能得到高質(zhì)量的RNA，而且能同時(shí)分離出細(xì)胞染色體DNA.本法對(duì)于冷凍時(shí)間長(zhǎng)、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核不易分離的組織標(biāo)本以及富含RNA酶的組織細(xì)胞(如胰腺)的RNA提取尤其適合。此法提取的RNA的質(zhì)量好和成功率高，已成為提取哺乳動(dòng)物細(xì)...

科研人員還在為如何選擇核酸染料而煩惱嗎？帶您認(rèn)識(shí)幾款優(yōu)秀的核酸染料一、李記GelRed,李記GelGreen——李記生物研發(fā)的兩款核酸染料。據(jù)不*統(tǒng)計(jì)，有強(qiáng)烈致癌、致畸作用的EB染料仍以90%的優(yōu)勢(shì)占據(jù)核酸染料使用量多，在眾多的EB替代染料中，名氣最大的要數(shù)Life公司的SYBR系列、美國(guó)Biotium公司的GelRed,GelReen染料，其他替代染料要么是EB,吖啶橙改名，要么是國(guó)內(nèi)不成熟的仿品，安全性毫無保障。Life公司的SYBRGreen,SYBRGoad,SYBR...

一、細(xì)胞增殖與細(xì)胞活性細(xì)胞增殖是活細(xì)胞的重要?理功能之?，細(xì)胞增殖與細(xì)胞活性檢測(cè)所用的方法相近，但實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌?。?xì)胞增殖是通過細(xì)胞增殖的物質(zhì)基礎(chǔ)判斷細(xì)胞的數(shù)量變化，例如細(xì)胞計(jì)數(shù)法，反應(yīng)的就是細(xì)胞真實(shí)的數(shù)量。而細(xì)胞活性檢測(cè)，則是通過檢測(cè)細(xì)胞受到藥物或其他措施處理后，標(biāo)志物產(chǎn)量或濃度的變化，進(jìn)而判斷藥物或處理措施的作用，細(xì)胞活性檢測(cè)所得結(jié)論，往往反映了實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的目的。細(xì)胞增殖檢測(cè)，因檢測(cè)標(biāo)志物的不同，目前大致分為四類：DNA合成檢測(cè)、代謝活性檢測(cè)、細(xì)胞增殖相關(guān)抗原檢測(cè)和ATP濃度...

生物大分子的貯藏保存可分為干態(tài)和液態(tài)貯藏兩種。蛋白質(zhì)失活受多種理化因素的影響，主要有空氣、溫度、水分、光線、酸堿度、樣品狀態(tài)、微生物活動(dòng)、保存時(shí)間和容器等。這些因素可單獨(dú)起作用，但更多情況是協(xié)同作用?？偟膩碚f，蛋白質(zhì)的保存主要考慮其構(gòu)型穩(wěn)定、活性中心的保護(hù)、避免輔助因子喪失等，以防止其變性、解聚或降解。由于溫度和水分對(duì)蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性影響很大，故蛋白質(zhì)最好是低溫、冷凍或冷凍干燥后低溫干燥保存。1.液態(tài)保存(1).在低溫下保存蛋白質(zhì)對(duì)熱敏感，溫度越高，穩(wěn)定性越差。因此，低溫保存蛋...