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當(dāng)前位置:首頁 > 產(chǎn)品中心 > 細(xì)胞生物學(xué) > 細(xì)胞凋亡 > AC12L062Caspase 1活細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(綠色)

Caspase 1活細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(綠色)

簡要描述:Caspase 1活細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(綠色)主要參與促炎細(xì)胞因子的激活和細(xì)胞凋亡過程。一旦與半胱天冬酶1結(jié)合,熒光試劑保留在細(xì)胞內(nèi)。結(jié)合抑制胱天蛋白酶1但不會阻止細(xì)胞凋亡的進(jìn)行,有多種參數(shù)可用于監(jiān)測細(xì)胞凋亡。

  • 產(chǎn)品型號:AC12L062
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時間:2024-08-07
  • 訪  問  量:1836

詳細(xì)介紹

品牌其他品牌貨號AC12L062
供貨周期現(xiàn)貨主要用途參與促炎細(xì)胞因子的激活和細(xì)胞凋亡過程。
應(yīng)用領(lǐng)域生物產(chǎn)業(yè)

Caspase 1活細(xì)胞凋亡檢測試劑綠色

產(chǎn)品描述
  活細(xì)胞凋亡檢測試劑盒基于半胱天冬酶的熒光抑制劑。這些抑制劑具有細(xì)胞滲透性和非細(xì)胞毒性。一旦進(jìn)入細(xì)胞,半胱天冬酶抑制劑與活性半胱天冬酶共價結(jié)合。 Caspase-1主要參與促炎細(xì)胞因子的激活和細(xì)胞凋亡過程。已經(jīng)證明胱天蛋白酶1對肽序列Tyr-Val-Ala-Asp(YVAD)具有底物選擇性。該試劑盒使用FAM-YVAD-FMK作為半胱天冬酶1活性的熒光指示劑。 FAM-YVAD-FMK在凋亡細(xì)胞中不可逆地結(jié)合活化的半胱天冬酶1。一旦與半胱天冬酶1結(jié)合,熒光試劑保留在細(xì)胞內(nèi)。結(jié)合抑制胱天蛋白酶1但不會阻止細(xì)胞凋亡的進(jìn)行,有多種參數(shù)可用于監(jiān)測細(xì)胞凋亡。
產(chǎn)品優(yōu)勢
  這種試劑盒旨在通過測量活細(xì)胞中的caspase 1活化來檢測細(xì)胞凋亡。它用于定量凋亡細(xì)胞中活化的半胱天冬酶1活性,或用于篩選半胱天冬酶1抑制劑。綠色標(biāo)記試劑FAM-YVAD-FMK允許通過熒光顯微鏡,流式細(xì)胞儀或熒光酶標(biāo)儀直接檢測凋亡細(xì)胞中活化的半胱天冬酶1。該試劑盒為所有必需組分提供優(yōu)化的分析方案。
技術(shù)資料
1.Ex(nm):493
2.Em(nm):517
訂購信息

產(chǎn)品名稱貨號規(guī)格價格
Caspase 1活細(xì)胞凋亡檢測試劑綠色AC12L06225T4680


產(chǎn)品組分

組分規(guī)格
A: FAM-YVAD-FMK 1 vial
B: Washing Buffer  100 mL
C: 500X Propidium Iodide 100 µL
D: 500X Hoechst Stain100 µL


實驗方案
1.用密度為5×105到2×106個細(xì)胞/ mL的測試化合物制備細(xì)胞。
2.將FAM-YVAD-FMK以1:150的比例加入到細(xì)胞溶液中。
3在室溫下孵育1小時。
4.將細(xì)胞沉淀,用緩沖液或生長培養(yǎng)基洗滌并重懸細(xì)胞。
5.在Ex / Em = 490 / 525nm處分析細(xì)胞。
注】:使用前將所有部件在室溫下解凍。
操作步驟
1.根據(jù)您的特異性誘導(dǎo)方案,將細(xì)胞培養(yǎng)至適于細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)的密度,但不超過2 x 106個細(xì)胞/ mL。同時,對于每種標(biāo)記條件,以與誘導(dǎo)群體相同的密度培養(yǎng)非誘導(dǎo)的陰性對照細(xì)胞群。以下是一些誘導(dǎo)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞凋亡的例子:
(1)用2μg/ ml喜tree堿處理Jurkat細(xì)胞3小時。
(2)用1μM星形孢菌素處理Jurkat細(xì)胞3小時。
(3)用4μg/ ml喜tree堿處理HL-60細(xì)胞4小時。
(4)用1μM星形孢菌素處理HL-60細(xì)胞4小時。
注】:應(yīng)對每個細(xì)胞系進(jìn)行單獨(dú)評估,以確定誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的合適細(xì)胞密度。
2.通過向FAM-YVAD-FMK(組分A)的小瓶中加入50μLDMSO制備150X FAM-YVAD-FMK DMSO儲備溶液。
3.將150×FAM-YVAD-FMK DMSO儲備溶液(來自步驟1)以1:150的比例添加到細(xì)胞溶液中,并將細(xì)胞在37℃,5%CO 2培養(yǎng)箱中孵育1小時。
注1】:對于FAM-YVAD-FMK標(biāo)記,細(xì)胞可以濃縮至~5×10 6個細(xì)胞/ mL。未使用的150X FAM-YVAD-FMK DMSO儲備溶液應(yīng)分為單次使用的等分試樣并儲存在 -20 ℃。
注2】:對于粘附細(xì)胞,用0.5mM EDTA輕輕提起細(xì)胞以保持細(xì)胞完整,并在用FAM-YVAD-FMK孵育之前用含血清的培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞一次。
注3】:適當(dāng)?shù)姆跤龝r間取決于所用的細(xì)胞類型和細(xì)胞濃度。優(yōu)化每個實驗的孵育時間。
4.將細(xì)胞以約200g旋轉(zhuǎn)5分鐘,并用1mL洗滌緩沖液(組分B)洗滌細(xì)胞兩次。將細(xì)胞重懸于所需量的洗滌緩沖液中。
注1】:FAM-YVAD-FMK是熒光的,因此清除任何未結(jié)合的試劑以消除背景非常重要。
注2】:對于分離的細(xì)胞,應(yīng)將細(xì)胞濃度調(diào)節(jié)至每個微量滴定板孔中2-5×10 5個細(xì)胞/100μL等分試樣,用于步驟6。
5.如果需要,用DNA染色標(biāo)記細(xì)胞(如用于死細(xì)胞的碘化丙錠,或用于細(xì)胞核染色的整個群體的Hoechst)。
6.通過熒光顯微鏡,流式細(xì)胞儀或熒光酶標(biāo)儀在Ex / Em = 490 / 525nm處檢測熒光強(qiáng)度(對于碘化丙錠,Ex / Em = 535/635 nm;對于Hoechst染料,Ex / Em = 350 / 461納米)。
(1)對于流式細(xì)胞儀,使用FL1通道監(jiān)測熒光強(qiáng)度(FL2通道用于碘化丙錠染色)。
(2)用于熒光顯微鏡和熒光酶標(biāo)儀。將100μL細(xì)胞懸浮液置于96孔黑壁/微量滴定板透明底部的每個孔中。
注】:如果需要平衡細(xì)胞濃度,調(diào)整誘導(dǎo)細(xì)胞的懸浮體積以接近非誘導(dǎo)細(xì)胞群的細(xì)胞密度。如果您的細(xì)胞治療不會導(dǎo)致受刺激細(xì)胞群數(shù)量的顯著損失,則此調(diào)整步驟是可選的。
(3)使用FITC通道在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞(用于碘化丙啶染色的TRITC通道,用于Hoechst染色的DAPI通道)。
(4)使用熒光酶標(biāo)儀,使用Ex / Em = 490 / 525nm(在515nm處截止)底部讀取模式監(jiān)測熒光強(qiáng)度。
注意事項
該產(chǎn)品僅限于科學(xué)實驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。



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